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牛布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(间接法)


牛布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒(Bovine Brucellosis Antibody Test Kit)

用于检测牛血清中的布鲁氏杆菌特异性抗体,用于牛的血清学诊断。

规格:1板/2板


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【试剂盒组分】

包被板

1板/2板

终止液

12 mL

酶结合物浓缩液

0.24 mL

阴性对照

0.1 mL

酶结合物稀释液

24 mL

阳性对照

0.1 mL

20×浓缩洗涤液

30 mL

血清稀释板

1块/2块

样本稀释液

60 mL

盖板膜

1张/2张

底物A液

12 mL

说明书

1份

底物B液

12 mL

【试剂盒有效期】

2~8℃避光保存,有效期为12个月。

【需自备的材料】

微量移液器、量筒、酶标仪(450 nm)、去离子水、离心机(4000 rpm)、恒温培养箱(25℃)、计时器等。

【注意事项】

1.   试剂盒使用前各试剂应平衡至室温(至少40 min),使用后放回2~8℃保存。

2.   不同批号的试剂盒组份不得混用,不同试剂使用时应防止交叉污染。

3.   底物液不能暴露于强光或接触氧化剂。

4.   必须使用符合药典规定的水(如蒸馏水、去离子水或纯水)稀释洗涤液。

5.   待检血清数量较多时,应先稀释完所有待检血清,再加到酶标板上,使反应时间一致。

6.   终止液为强酸,若不慎溅到皮肤上请立即清洗。

7.   移液时,应尽量准确,防止产生气泡。

8.   应严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。




【操作方法】

一、试剂配制

洗涤工作液:使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温(20~25℃),并摇动,使沉淀溶解(最好在37℃恒温培养箱中加热5~10 min),然后用蒸馏水作20倍稀释(例如:30 mL的浓缩洗涤液加上570 mL蒸馏水)混匀,稀释好的洗涤液2~8℃可存放7日。

二、样品处理

1.     取动物全血,待血液凝固后,4000 rpm离心10 min,收集上清。也可以自然凝固析出血清,无溶血。

2.     在血清稀释板中按1:50稀释阴、阳性对照品和待检血清样品(如245 ?L样本稀释液中加5 ?L待检血清样品),充分混匀。

三、操作步骤

1.     取包被板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100 ?L加至抗原包被板中。同时设阴性对照2孔、阳性对照2孔,取稀释好的阴性、阳性对照各100 ?L分别加入反应孔中,轻轻振匀孔中样品,盖上盖板膜,室温下(25±2℃)温育30min。

2.     弃去孔中的溶液,每孔加入稀释好的洗涤液300 ?L,静置30 s后,弃去洗涤液。洗涤4次后在吸水纸上拍干(必须充分拍干)。

3.     配制酶结合物工作液:按体积比1:100(1份酶结合物浓缩液+99份酶结合物稀释液)混匀。

4.     每孔加酶结合物工作液100 ?L,盖上盖板膜,室温(25±2℃)下温育30 min。

5.     弃去孔中的溶液,洗涤4次,方法同2。

6.     将底物A液与底物B液按1:1混合均匀,加入孔中,100 ?L/孔,盖上盖板膜,室温下反应10 min。

7.     每孔加入终止液50 ?L,5 min内测定结果。

【结果判定】

在酶标仪上读各孔OD450nm值。

试验成立的条件是:

阴性对照平均OD450nm值<0.20且阳性对照平均OD450nm值≥1.0,试验结果才有效;否则,应进行重复试验。

计算方法:

S/P=

样品OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值

阳性对照平均OD450nm值-阴性对照平均OD450nm值

阴阳性判断:

S/P<0.08时,判为阴性;S/P≥0.1时,判为阳性;0.08≤S/P<0.1,判为可疑。